RECOMBINEERING

utvecklingen av genteknik revolutionerade modern biologi, vilket möjliggjorde direkt manipulation av ett organisms DNA. Nyckeln till denna teknik var upptäckten av restriktionsenzymer, proteiner som när de renades skär DNA vid exakta korta sekvenser in vitro. Olika DNA-molekyler, skurna med samma restriktionsenzym(er), kan sedan förenas med DNA-ligas för att generera en rekombinant molekyl. Sådant genetiskt manipulerat plasmid-DNA transformerades rutinmässigt till Escherichia coli för vidare analys och manipulation. Även om dessa gentekniska tekniker är kraftfulla och fortsätter att användas idag, har en ny mycket effektiv metod för direkt modifiering av DNA inom E. coli och andra bakterier utvecklats under de senaste ~15 åren: rekombinering.

rekombination är in vivo homolog rekombinationsmedierad genteknik. Den homologa rekombinationen förmedlas av bakteriofagbaserade rekombinationssystem såsom ? Rött system, RecET från Rac prophage, eller andra. I motsats till klassisk in vitro-genteknik är rekombinering inte beroende av restriktionsenzymer. Således är platsen för begränsningsplatser inte längre ett problem, och användaren definierar konstruktionen och dess plats till basparet. Liksom genteknik kan rekombinering användas för att göra raderingar, punktmutationer, duplikationer, inversioner, fusioner och taggar. I korthet utförs rekombinering genom att införa linjära DNA-substrat innehållande den önskade förändringen och korta flankerande homologier till mål-DNA i celler som uttrycker de fagkodade rekombinationsenzymerna. Dessa enzymer rekombinerar det linjära DNA vid målet, vilket ger rekombinanta molekyler.

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.