REKOMBINERING

udviklingen af genteknologi revolutionerede moderne biologi, der tillader direkte manipulation af en organismer DNA. Nøglen til denne teknologi var opdagelsen af restriktionssymmer, proteiner, der, når de renses, skar DNA ved præcise korte sekvenser in vitro. Forskellige DNA-molekyler, skåret med samme restriktion(er), kunne derefter sammenføjes med DNA-ligase for at generere et rekombinant molekyle. Et sådant genetisk manipuleret plasmid-DNA blev rutinemæssigt omdannet til Escherichia coli til yderligere analyse og manipulation. Selvom disse gentekniske teknikker er kraftfulde og fortsat bruges i dag, er der udviklet en ny meget effektiv metode til direkte modifikation af DNA i E. coli og andre bakterier i de sidste ~15 år: rekombinering.

Rekombinering er in vivo homolog rekombinationsmedieret genteknologi. Den homologe rekombination medieres af bakteriofagbaserede rekombinationssystemer såsom ? Rødt system, RecET fra Rac-profagen eller andre. I modsætning til klassisk in vitro genteknologi er rekombinering ikke afhængig af restriktion. Således er placeringen af begrænsningssteder ikke længere et problem, og brugeren definerer konstruktionen og dens placering til basisparet. Ligesom genteknologi kan rekombinering bruges til at lave sletninger, punktmutationer, duplikationer, inversioner, fusioner og tags. Kort, rekombinering udføres ved at indføre lineære DNA-substrater indeholdende den ønskede ændring og korte flankerende homologier til mål-DNA ‘ et i celler, der udtrykker de fagkodede rekombinationssymmer. Disse rekombinerer det lineære DNA ved målet, hvilket giver rekombinante molekyler.

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.