Anticorpos recombinantes: uma visão geral

anticorpos recombinantes (rAbs) são anticorpos monoclonais que são gerados in vitro usando genes sintéticos. Ao contrário dos anticorpos monoclonais (mAbs) que são produzidos usando tecnologias tradicionais baseadas em hibridoma, os rAbs não precisam de hibridomas e animais no processo de produção.Os anticorpos monoclonais e recombinantes podem ser usados na ciência biomédica e na pesquisa toxicológica, e são tratamentos terapêuticos eficazes para o câncer, distúrbios autoimunes e uma série de outras doenças. No entanto, enquanto os anticorpos monoclonais se tornaram uma das ferramentas mais comuns na ciência biomédica e na medicina devido à sua capacidade de ligar e neutralizar ou destruir antígenos específicos das células, o método de produção de ascite causa dor e desconforto significativos aos animais usados no processo.Como tal, os governos da Austrália, Alemanha, Holanda e Reino Unido o proibiram em favor de métodos in vitro. Os EUA também endossam o uso de métodos in vitro como o procedimento padrão para a produção de mAbs.

no entanto, é importante notar que os métodos in vitro envolvendo hibridomas também têm suas próprias limitações, que incluem o seguinte:

  • requer imunização e subsequente eutanásia dos animais utilizados no processo.
  • lento e trabalhoso.
  • muitas vezes causam reações imunológicas, de modo que os anticorpos precisam ser alterados e “humanizados” antes que possam ser administrados aos pacientes.

produção de anticorpos recombinantes

basicamente, os anticorpos recombinantes são anticorpos monoclonais gerados in vitro usando genes sintéticos. A tecnologia envolve a recuperação de genes de anticorpos de células – fonte, amplificando e clonando os genes em um vetor de fago apropriado, introduzindo o vetor em um hospedeiro (bactérias, leveduras ou linhagens celulares de mamíferos) e alcançando a expressão de quantidades adequadas de anticorpo funcional.

os anticorpos recombinantes podem ser clonados a partir de qualquer espécie de animal produtor de anticorpos, desde que existam iniciadores de oligonucleotídeos apropriados ou sondas de hibridização disponíveis. A capacidade de manipular os genes de anticorpos também permite gerar novos anticorpos e fragmentos de anticorpos (fragmentos Fab e scFv) in vitro. Bibliotecas de exibição, comumente expressas em fago ou levedura, podem então ser analisadas para selecionar as características desejáveis decorrentes de tais mudanças na sequência de anticorpos.

como você seleciona aqueles que exibem o anticorpo desejado? Você pode fazer isso através de um processo chamado panning. Um dos procedimentos de panning mais simples é uma variação do procedimento ELISA comum. Para fazer isso, você incuba a biblioteca de anticorpos com o alvo imobilizado em um sólido. Qualquer fago não ligado é removido através da lavagem e os fagos especificamente ligados são eluídos e amplificados infectando as células de E. coli. O processo é repetido 3 a 4 vezes para isolar os fagos que estão exibindo anticorpos com a maior afinidade e estabilidade. Os Genes para os anticorpos selecionados são sequenciados e submetidos à maturação de afinidade. Os genes para os melhores anticorpos podem então ser transferidos para um sistema de expressão apropriado para produção em larga escala.

as vantagens do uso de anticorpos recombinantes

  • maior reprodutibilidade e controle. Embora os pesquisadores frequentemente percam o controle do antígeno depois de injetá-lo no animal hospedeiro em sistemas baseados em hibridoma, a produção de anticorpos recombinantes lhes permite mais controle sobre o antígeno. Como os rAbs são definidos pelas sequências que os codificam, eles são mais confiáveis e fornecem resultados mais reproduzíveis do que os mAbs. Ao ajustar as condições experimentais, os pesquisadores podem facilmente favorecer o isolamento de anticorpos contra antígenos ou características do antígeno.
  • tempo de produção reduzido. Usando a tecnologia de anticorpos recombinantes, um anticorpo específico do antígeno pode ser produzido em apenas oito semanas. Por outro lado, a tecnologia hybridoma requer um mínimo de quatro meses para produzir um anticorpo adequado.
  • conversão Isotípica. Um fragmento de anticorpo recombinante desejável pode ser facilmente convertido em uma espécie, isótipo ou subtipo diferente, adicionando o domínio constante apropriado. Isso facilita a troca de anticorpos em um formato mais preferível.
  • tecnologia livre de animais. Anticorpos recombinantes podem ser produzidos sem o uso de animais no processo. Isso elimina as inúmeras preocupações éticas e de bem-estar animal comumente associadas à produção tradicional de anticorpos monoclonais.

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