Recombinant antilichamen: an Overview

Recombinant antilichamen (rAbs) zijn monoklonale antilichamen die in vitro worden gegenereerd met behulp van synthetische genen. In tegenstelling tot monoclonal antilichamen (mAbs) die gebruikend traditionele op hybridoma-gebaseerde technologieën worden geproduceerd, hebben rAbs geen hybridomas en dieren in het productieproces nodig.

zowel monoklonale als recombinante antilichamen kunnen worden gebruikt in de biomedische wetenschap en toxicologisch onderzoek en zijn effectieve therapeutische behandelingen voor kanker, auto-immuunziekten en een groot aantal andere ziekten. Nochtans, terwijl monoclonal antilichamen één van de gemeenschappelijkste hulpmiddelen in biomedische wetenschap en geneeskunde wegens hun capaciteit zijn geworden om cel-specifieke antigenen te binden en te neutraliseren of te vernietigen, veroorzaakt de ascites methode van productie significante pijn en ongemak aan de dieren die in het proces worden gebruikt.

als zodanig verboden de regeringen van Australië, Duitsland, Nederland en het Verenigd Koninkrijk het ten gunste van in vitro-methoden. De VS staan ook achter het gebruik van in vitro-methoden als standaardprocedure voor de productie van mAbs.

het is echter belangrijk op te merken dat in vitro methoden waarbij hybridomen betrokken zijn, ook hun eigen beperkingen hebben, waaronder de volgende::

  • vereisen immunisatie en daaropvolgende euthanasie van de dieren gebruikt in het proces.
  • langzaam en arbeidsintensief.
  • veroorzaakt vaak immuunreacties, zodat de antilichamen moeten worden veranderd en” gehumaniseerd ” voordat ze aan patiënten kunnen worden toegediend.

productie van recombinante antilichamen

in principe zijn recombinante antilichamen monoklonale antilichamen die in vitro worden gegenereerd met behulp van synthetische genen. De technologie impliceert het terugwinnen van antilichaamgenen van broncellen, het versterken en het klonen van de genen in een aangewezen faagvector, het introduceren van de vector in een gastheer (bacteriën, gist, of zoogdiercellijnen), en het bereiken van uitdrukking van adequate hoeveelheden functioneel antilichaam.

recombinante antilichamen kunnen worden gekloond van elk antilichaamproducerende dierensoort, mits er geschikte oligonucleotide-primers of hybridisatiesondes beschikbaar zijn. De capaciteit om de antilichaamgenen te manipuleren maakt het ook mogelijk om nieuwe antilichamen en antilichaamfragmenten (Fab-fragmenten en scFv) in vitro te produceren. De vertoningsbibliotheken, algemeen uitgedrukt in faag of gist, kunnen dan worden geanalyseerd om voor wenselijke kenmerken te selecteren die uit dergelijke veranderingen in antilichaamopeenvolging voortvloeien.

hoe selecteert u degene die uw gewenste antilichaam vertonen? U kunt het doen door middel van een proces genaamd panning. Een van de eenvoudigste panning procedures is een variatie van de gemeenschappelijke ELISA-procedure. Om dit te doen, incubeert u de antilichaambibliotheek met het doel dat op Vast lichaam wordt geà mmobiliseerd. Elke ongebonden faag wordt verwijderd door wassen en specifiek gebonden Fagen worden geëlueerd en versterkt door E. coli-cellen te infecteren. Het proces wordt herhaald 3 tot 4 keer om de Fagen te isoleren die antilichamen met de hoogste affiniteit en stabiliteit tonen. De genen voor de geselecteerde antilichamen worden gerangschikt en aan affiniteitsrijping onderworpen. De genen voor de beste antilichamen kunnen dan in een aangewezen uitdrukkingssysteem voor productie op grote schaal worden overgebracht.

de voordelen van het gebruik van recombinante antilichamen

  • verhoogde reproduceerbaarheid en controle. Terwijl de onderzoekers controle van het antigeen vaak verliezen zodra zij het in het gastheerdier in op hybridoma-gebaseerde systemen hebben ingespoten, staat de recombinante antilichaamproductie hen meer controle over het antigeen toe. Aangezien rAbs door de opeenvolgingen worden bepaald die hen coderen, zijn zij betrouwbaarder en verstrekken meer reproduceerbare resultaten dan mAbs. Door experimentele voorwaarden aan te passen, kunnen de onderzoekers de isolatie van antilichamen tegen antigenen of antigeenkarakteristieken gemakkelijk bevoordelen.
  • verminderde productietijd. Met behulp van recombinante antilichaamtechnologie, kan een antigeen-specifiek antilichaam in slechts acht weken worden geproduceerd. Anderzijds vereist de hybridomatechnologie een minimum van vier maanden om een geschikt antilichaam te produceren.
  • Isotype conversie. Een wenselijk recombinant antilichaamfragment kan gemakkelijk in een verschillende species, isotype of subtype worden omgezet door het juiste constante domein toe te voegen. Dit maakt het gemakkelijker om antilichamen om te zetten in een beter formaat.
  • diervrije technologie. Recombinante antilichamen kunnen worden geproduceerd zonder gebruik te maken van dieren in het proces. Dit elimineert de talrijke ethische en dierenwelzijnsproblemen algemeen geassocieerd met traditionele monoclonal antilichaamproductie.

Geef een antwoord

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd.