Rekombinante Antistoffer: En Oversikt

Rekombinante antistoffer (rAbs) er monoklonale antistoffer som genereres in vitro ved bruk av syntetiske gener. I motsetning til monoklonale antistoffer (mAbs) som produseres ved hjelp av tradisjonell hybridombasert teknologi, trenger rab ikke hybridomer og dyr i produksjonsprosessen.

både monoklonale og rekombinante antistoffer kan brukes i biomedisinsk vitenskap og toksikologisk forskning, og er effektive terapeutiske behandlinger for kreft, autoimmune sykdommer og en rekke andre sykdommer. Imidlertid, mens monoklonale antistoffer har blitt et av de vanligste verktøyene i biomedisinsk vitenskap og medisin på grunn av deres evne til å binde og nøytralisere eller ødelegge cellespesifikke antigener, forårsaker ascites produksjonsmetoden betydelig smerte og ubehag for dyrene som brukes i prosessen.

som sådan forbød regjeringene I Australia, Tyskland, Nederland og Storbritannia Det til fordel for in vitro-metoder. USA støtter også bruk av in vitro-metoder som standardprosedyre for produksjon av mAbs.

det Er imidlertid viktig å merke seg at in vitro-metoder som involverer hybridomer også har sine egne begrensninger, som inkluderer følgende:

  • Krever immunisering og påfølgende eutanasi av dyrene som brukes i prosessen.
  • Sakte og arbeidskrevende.
  • forårsaker ofte immunreaksjoner, slik at antistoffene må endres og «humaniseres» før de kan administreres til pasienter.

Produksjon Av Rekombinante Antistoffer

rekombinante antistoffer er I Utgangspunktet monoklonale antistoffer generert in vitro ved bruk av syntetiske gener. Teknologien innebærer å gjenopprette antistoffgener fra kildeceller, forsterke og klone genene til en passende fagvektor, introdusere vektoren til en vert (bakterier, gjær eller pattedyrcellelinjer), og oppnå uttrykk for tilstrekkelige mengder funksjonelt antistoff.

Rekombinante antistoffer kan klones fra alle arter av antistoffproduserende dyr, forutsatt at det finnes egnede oligonukleotid-primere eller hybridiseringsprober tilgjengelig. Evnen til å manipulere antistoffgenene gjør det også mulig å generere nye antistoffer og antistofffragmenter (Fab-fragmenter og scFv) in vitro. Skjermbiblioteker, vanligvis uttrykt i fag eller gjær, kan deretter analyseres for å velge ønskelige egenskaper som følge av slike endringer i antistoffsekvens.

hvordan velger du de som viser ønsket antistoff? Du kan gjøre det gjennom en prosess som kalles panorering. En av de enkleste panoreringsprosedyrene er en variant av vanlig ELISA-prosedyre. For å gjøre dette, inkuberer du antistoffbiblioteket med målet immobilisert på et fast stoff. Enhver ubundet fag fjernes gjennom vask og spesielt bundet fag elueres og forsterkes ved å infisere E. coli-celler. Prosessen gjentas 3 til 4 ganger for å isolere fag som viser antistoffer med høyest affinitet og stabilitet. Gener for de valgte antistoffene blir sekvensert og utsatt for affinitetsmodning. Genene for de beste antistoffene kan deretter overføres til et passende uttrykkssystem for storskala produksjon.

Fordelene Ved Bruk Av Rekombinante Antistoffer

  • Økte reproduserbarheten og kontrollen. Mens forskere ofte mister kontrollen over antigenet når de har injisert det inn i vertsdyret i hybridombaserte systemer, gir rekombinant antistoffproduksjon dem mer kontroll over antigenet. Siden rab er definert av sekvensene som koder dem, er de mer pålitelige og gir mer reproduserbare resultater enn mAbs. Ved å justere eksperimentelle forhold kan forskere lett favorisere isolering av antistoffer mot antigener eller antigenegenskaper.
  • Redusert produksjonstid. Ved hjelp av rekombinant antistoffteknologi kan et antigen-spesifikt antistoff produseres på så lite som åtte uker. På den annen side krever hybridomteknologi minst fire måneder for å produsere et egnet antistoff.
  • Isotype konvertering. Et ønskelig rekombinant antistofffragment kan enkelt omdannes til en annen art, isotype eller subtype ved å legge til riktig konstant domene. Dette gjør det lettere å bytte antistoffer til et mer foretrukket format.
  • Dyrefri teknologi. Rekombinante antistoffer kan produseres uten å bruke noen dyr i prosessen. Dette eliminerer de mange etiske og dyrevelferd bekymringer ofte forbundet med tradisjonell monoklonale antistoffproduksjon.

Legg igjen en kommentar

Din e-postadresse vil ikke bli publisert.