Rekombináns antitestek: áttekintés

a rekombináns antitestek (rAbs) monoklonális antitestek, amelyeket In vitro szintetikus gének felhasználásával állítanak elő. A monoklonális antitestekkel (MAB-k) ellentétben, amelyeket hagyományos hibridóma-alapú technológiákkal állítanak elő, a raboknak nincs szükségük hibridomákra és állatokra a gyártási folyamatban.

mind a monoklonális, mind a rekombináns antitestek felhasználhatók az orvosbiológiai tudományban és a toxikológiai kutatásban, és hatékony terápiás kezelések a rák, az autoimmun rendellenességek és számos más betegség kezelésére. Míg azonban a monoklonális antitestek az orvosbiológiai tudomány és az orvostudomány egyik leggyakoribb eszközévé váltak, mivel képesek megkötni, semlegesíteni vagy elpusztítani a sejtspecifikus antigéneket, az ascites előállítási módszer jelentős fájdalmat és kényelmetlenséget okoz a folyamatban használt állatoknak.

mint ilyen, Ausztrália, Németország, Hollandia és az Egyesült Királyság kormányai betiltották az in vitro módszerek javára. Az Egyesült Államok szintén támogatja az in vitro módszerek alkalmazását a MAB-ok előállításának alapértelmezett eljárásaként.

fontos azonban megjegyezni, hogy a hibridomákat magában foglaló in vitro módszereknek is vannak saját korlátai, amelyek a következőket tartalmazzák:

  • az eljárás során használt állatok immunizálását és az azt követő eutanáziát igényelnek.
  • lassú és munkaigényes.
  • gyakran okoznak immunreakciókat, ezért az antitesteket meg kell változtatni és “humanizálni” kell, mielőtt beadhatók a betegeknek.

rekombináns antitestek előállítása

alapvetően a rekombináns antitestek szintetikus gének felhasználásával in vitro előállított monoklonális antitestek. A technológia magában foglalja az antitest gének kinyerését a forrássejtekből, a gének amplifikálását és klónozását egy megfelelő fágvektorba, a vektor bejuttatását egy gazdaszervezetbe (baktériumok, élesztő vagy emlős sejtvonalak), és megfelelő mennyiségű funkcionális antitest expressziójának elérését.

rekombináns antitestek bármely antitest-termelő állatfajból klónozhatók, feltéve, hogy rendelkezésre állnak megfelelő oligonukleotid primerek vagy hibridizációs próbák. Az antitest gének manipulálásának képessége lehetővé teszi új antitestek és antitest fragmensek (Fab fragmensek és scFv) in vitro előállítását is. Kijelző könyvtárak, általában fágban vagy élesztőben kifejezve, ezután elemezhetjük az antitest szekvencia ilyen változásaiból eredő kívánatos jellemzők kiválasztását.

hogyan választja ki azokat, amelyek megjelenítik a kívánt antitestet? Meg tudod csinálni egy folyamat, az úgynevezett pásztázás. Az egyik legegyszerűbb pásztázási eljárás a közös ELISA eljárás változata. Ehhez inkubálja az antitest könyvtárat úgy, hogy a célpont szilárd anyagon immobilizálva legyen. Minden nem kötött fágot mosással távolítanak el, és a speciálisan kötött fágokat E. coli sejtek fertőzésével eluálják és amplifikálják. Az eljárást 3-4 alkalommal megismételjük, hogy izoláljuk azokat a fágokat, amelyek a legnagyobb affinitással és stabilitással rendelkező antitesteket mutatják. A kiválasztott antitestek génjeit szekvenáljuk és affinitás érésnek vetjük alá. A legjobb antitestek génjei ezután átvihetők egy megfelelő expressziós rendszerbe a nagyüzemi termeléshez.

a rekombináns antitestek

  • alkalmazásának előnyei növelték a reprodukálhatóságot és a kontrollt. Míg a kutatók gyakran elveszítik az antigén irányítását, miután hibridoma alapú rendszerekben befecskendezték a gazdaállatba, a rekombináns antitest termelés lehetővé teszi számukra az antigén feletti nagyobb ellenőrzést. Mivel a rabokat az őket kódoló szekvenciák határozzák meg, megbízhatóbbak és reprodukálhatóbb eredményeket nyújtanak, mint a MAB-ok. A kísérleti körülmények beállításával a kutatók könnyen elősegíthetik az antigének vagy antigén jellemzők elleni antitestek izolálását.
  • csökkent gyártási idő. Rekombináns antitest technológia alkalmazásával antigén-specifikus antitest akár nyolc hét alatt is előállítható. Másrészt a hybridoma technológia legalább négy hónapot igényel a megfelelő antitest előállításához.
  • Izotípus átalakítás. Egy kívánatos rekombináns antitest fragmentum a megfelelő állandó domén hozzáadásával könnyen átalakítható különböző fajokká, izotípusokká vagy altípusokká. Ez megkönnyíti az antitestek előnyösebb formátumra váltását.
  • Állatmentes technológia. Rekombináns antitestek előállíthatók anélkül, hogy állatokat használnának a folyamatban. Ez kiküszöböli azokat a számos etikai és állatjóléti aggályokat, amelyek általában a hagyományos monoklonális antitest-termeléssel kapcsolatosak.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.