REKOMBINOINTI

geenitekniikan kehitys mullisti modernin biologian mahdollistaen eliöiden DNA: n suoran manipuloinnin. Tämän teknologian avain oli restriktioentsyymien, proteiinien, keksiminen, jotka puhdistuessaan leikkaavat DNA: ta tarkoin lyhyissä jaksoissa in vitro. Eri DNA-molekyylit, jotka on leikattu samalla restriktioentsyymillä, voidaan sitten yhdistää DNA-ligaasilla rekombinanttimolekyyliksi. Tällainen geenimuunneltu plasmidi-DNA muunnettiin rutiininomaisesti Escherichia coli-bakteeriksi lisäanalyysejä ja-manipulointia varten. Vaikka nämä geenitekniikan tekniikoita ovat tehokkaita ja edelleen käytetään tänään, uusi erittäin tehokas menetelmä suoraan muuttamalla DNA sisällä E. coli ja muut bakteerit on kehitetty viime ~15 vuotta: rekombineering.

rekombinaatio on in vivo homologinen rekombinaatiovälitteinen geenitekniikka. Homologisen rekombinaation välittäjinä toimivat bakteriofagipohjaiset rekombinaatiojärjestelmät, kuten … Punainen järjestelmä, RecET alkaen Rac profage, tai muut. Toisin kuin klassinen in vitro-geenitekniikka, rekombinointi ei perustu restriktioentsyymeihin. Rajoituspaikkojen sijainti ei siis ole enää ongelma, vaan käyttäjä määrittelee Konstruktion ja sen sijainnin perusparille. Geenitekniikan tavoin rekombinaatiolla voidaan tehdä poistoja, pistemutaatioita, kaksoiskappaleita, inversioita, fuusioita ja tägejä. Lyhyesti rekombinaatio suoritetaan tuomalla lineaariset DNA-substraatit, jotka sisältävät halutun muutoksen, ja lyhyt rinnakkainen homologiat kohde-DNA: han soluihin, jotka ilmentävät faagikoodattuja rekombinaatioentsyymejä. Nämä entsyymit rekombinoivat kohteen lineaarista DNA: ta tuottaen rekombinantteja molekyylejä.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.