REKOMBINEERING

vývoj genetického inženýrství způsobil revoluci v moderní biologii, umožňující přímou manipulaci s DNA organismů. Klíčem k této technologii byl objev restrikčních enzymů, proteinů, které při čištění, řez DNA v přesných krátkých sekvencích in vitro. Různé molekuly DNA, řezané stejným restrikčním enzymem(enzymy), by pak mohly být spojeny dna ligázou za vzniku rekombinantní molekuly. Taková geneticky upravená plazmidová DNA byla rutinně přeměněna na Escherichia coli pro další analýzu a manipulaci. Ačkoli tyto techniky genetického inženýrství jsou silné a nadále se používají i dnes, v posledních ~15 letech byla vyvinuta nová vysoce účinná metoda pro přímou modifikaci DNA v e.coli a dalších bakteriích: rekombineering.

Rekombinování je in vivo homologní rekombinace zprostředkované genetické inženýrství. Homologní rekombinace je zprostředkována rekombinačními systémy na bázi bakteriofágů, jako je ? Červený systém, RecET z rasového proroctví nebo jiné. Na rozdíl od klasického genetického inženýrství in vitro se rekombineering nespoléhá na restrikční enzymy. Tím pádem, umístění restrikčních míst již není problém, a uživatel definuje konstrukt a jeho umístění k základnímu páru. Stejně jako genetické inženýrství lze rekombineering použít k vytváření delecí, bodových mutací, duplikací, inverzí, fúzí a značek. Stručně řečeno, rekombineering se provádí zavedením lineárních dna substrátů obsahujících požadovanou změnu a krátkých sousedních homologií do cílové DNA do buněk exprimujících rekombinační enzymy kódované fágem. Tyto enzymy rekombinují lineární DNA na cíl, čímž se získají rekombinantní molekuly.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.