Rekombinantní protilátky: přehled

rekombinantní protilátky (Rab) jsou monoklonální protilátky, které se generují in vitro za použití syntetických genů. Na rozdíl od monoklonálních protilátek (Mab), které se vyrábějí pomocí tradičních hybridomových technologií, Rab nepotřebují ve výrobním procesu hybridomy a zvířata.

monoklonální i rekombinantní protilátky mohou být použity v biomedicínské vědě a toxikologickém výzkumu a jsou účinnou terapeutickou léčbou rakoviny, autoimunitních poruch a řady dalších nemocí. Nicméně, zatímco monoklonální protilátky se staly jedním z nejběžnějších nástrojů v biomedicínské vědě a medicíně kvůli jejich schopnosti vázat a neutralizovat nebo zničit buněčné specifické antigeny, způsob produkce ascitu způsobuje zvířatům používaným v procesu značnou bolest a nepohodlí.

jako takové vlády Austrálie, Německa, Nizozemska a Spojených Kingdonů zakázaly ve prospěch metod in vitro. USA také schvalují použití metod in vitro jako výchozího postupu pro výrobu mAbs.

je však důležité poznamenat, že metody in vitro zahrnující hybridomy mají také svá vlastní omezení, která zahrnují následující:

  • vyžadují imunizaci a následnou eutanazii zvířat používaných v procesu.
  • pomalé a pracné.
  • často způsobují imunitní reakce, takže protilátky je třeba před podáním pacientům změnit a „humanizovat“.

produkce rekombinantních protilátek

rekombinantní protilátky jsou v zásadě monoklonální protilátky generované in vitro za použití syntetických genů. Tato technologie zahrnuje obnovu genů protilátek ze zdrojových buněk, amplifikaci a klonování genů do vhodného fágového vektoru, zavedení vektoru do hostitele (bakterie, kvasinky nebo buněčné linie savců) a dosažení exprese odpovídajícího množství funkční protilátky.

rekombinantní protilátky mohou být klonovány z jakéhokoli druhu zvířat produkujících protilátky za předpokladu, že jsou k dispozici vhodné oligonukleotidové primery nebo hybridizační sondy. Schopnost manipulovat s geny protilátek také umožňuje vytvářet nové protilátky a fragmenty protilátek (Fab fragmenty a scFv) in vitro. Zobrazovací knihovny, běžně exprimované ve fágu nebo kvasinkách, pak mohou být analyzovány, aby se vybraly žádoucí vlastnosti vyplývající z takových změn v sekvenci protilátek.

jak vyberete ty, které zobrazují požadovanou protilátku? Můžete to udělat procesem zvaným posouvání. Jedním z nejjednodušších postupů rýžování je variace běžného postupu ELISA. Chcete-li to provést, inkubujete knihovnu protilátek s cílem imobilizovaným na pevné látce. Jakýkoli nevázaný fág je odstraněn promytím a specificky vázané fágy jsou eluovány a amplifikovány infikováním buněk E. coli. Proces se opakuje 3 až 4krát, aby se izolovaly fágy, které vykazují protilátky s nejvyšší afinitou a stabilitou. Geny pro vybrané protilátky jsou sekvenovány a podrobeny afinitnímu zrání. Geny pro nejlepší protilátky pak mohou být přeneseny do vhodného expresního systému pro velkovýrobu.

Výhody použití rekombinantních protilátek

  • zvýšily reprodukovatelnost a kontrolu. Zatímco vědci často ztrácejí kontrolu nad antigenem, jakmile jej vstříknou do hostitelského zvířete v systémech založených na hybridomu, produkce rekombinantních protilátek jim umožňuje větší kontrolu nad antigenem. Protože Rab jsou definovány sekvencemi, které je kódují, jsou spolehlivější a poskytují reprodukovatelnější výsledky než Mab. Úpravou experimentálních podmínek mohou vědci snadno upřednostňovat izolaci protilátek proti antigenům nebo antigenním charakteristikám.
  • zkrácení doby výroby. Použitím technologie rekombinantní protilátky může být protilátka specifická pro antigen produkována za pouhých osm týdnů. Na druhé straně technologie hybridomu vyžaduje minimálně čtyři měsíce k vytvoření vhodné protilátky.
  • konverze Izotypu. Žádoucí fragment rekombinantní protilátky může být snadno přeměněn na jiný druh, izotyp nebo podtyp přidáním příslušné konstantní domény. To usnadňuje přepínání protilátek do výhodnějšího formátu.
  • technologie bez zvířat. Rekombinantní protilátky mohou být produkovány bez použití zvířat v procesu. To eliminuje četné etické a dobré životní podmínky zvířat, které jsou běžně spojeny s tradiční produkcí monoklonálních protilátek.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.